慢性束缚应激致大鼠持续性高血糖症与孤束核损伤有关

目的 探讨孤束核联合亚核前部（acNTS）损伤在慢性束缚应激（CRS）所致的胰岛素抵抗性高血糖症发生中的作用。 方法 采用CRS大鼠模型（n=20;7 d束缚+3 d自由活动，共40 d），检测葡萄糖代谢相关指标。 结果 CRS导致约1/3的个体（n=7）持续性的中度胰岛素抵抗性高血糖（空腹血糖不超过11 mmol/L）。CRS高血糖鼠acNTS可观察到神经元染色浓缩，Caspase-3表达和TUNEL阳性染色，提示出现神经元凋亡样改变。机械损伤acNTS（n=6），空腹血糖水平逐渐升高，也能导致胰岛素抵抗性高血糖, 且高胰岛素血症、胰岛平均体积增大和血清皮质酮水平不变等特点与CRS小鼠一致。 结论 CRS损伤了acNTS的葡萄糖敏感神经元，从而使血糖调节紊乱。     

胚胎早期胰腺发育中相关因子表达的变化

目的 探讨人胚胎胰腺发育过程中相关因子表达的变化，为胚胎胰腺移植治疗糖尿病提供基础性研究。方法 对7～12周胎龄段的胰腺采用免疫组化S-ABC法分析胰腺发育中相关因子的表达变化、胰岛的分化和形成。结果 胰岛素、胰升糖素、生长激素抑制因子及细胞角蛋白在胚胎胰腺发育中7周开始表达，与胰岛的分化和形成一致，随着胎龄的增加表达增强；IGF-Ⅰ及Ⅶ因子在胚胎12周时出现在胰腺间质内。结论 胰岛素、胰升糖素、细胞角蛋白和IGF-Ⅰ在人胚胎胰腺的发育中起着重要的调控作用，与胰腺内外分泌腺的分化和形成有关；12周后的胚胎胰腺可以作为胚胎胰腺移植的供体。     

TGFβ1及其受体在大鼠整胚及胎肺发育过程中的表达

目的：观察TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育中的表达, 探讨它们与大鼠整胚及胎肺发育间的相互关系和作用机制.方法：半定量RT-PCR分析3种因子在13 ～17 d 全胚中的变化情况;免疫组化法检测3种因子在15 ～17 d 胎肺中的表达及该组织发育结构特点.结果：半定量RT-PCR示, 3种因子在发育13 ～15 d表达呈递增趋势, 16 ～17 d 出现下降.免疫组化结果显示, TGFβ1主要位于发育中支气管上皮细胞内, TβRⅠ、 TβRⅡ位于原始肺泡组织.结论：TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育过程中起着重要的调控作用, 尤其是对组织器官形态的发生.     

干扰乳酸脱氢酶A表达对ErbB2高表达乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 探讨体外干扰乳酸脱氢酶A（LDHA）表达对人类表皮生长因子受体2（ErbB2）高表达乳腺癌SK-BR-3和MDA-MB-453细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法 用siLDHA转染（以转染scramble siRNA为阴性对照）SK-BR-3和MDA-MB-453细胞干扰LDHA的表达;Western blot法检测LDHA蛋白表达水平;Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力;采用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测定细胞的LDH活性;采用葡萄糖和乳酸检测试剂盒分别测定培养基中的葡萄糖浓度和乳酸浓度,计算细胞对葡萄糖的摄取量和乳酸生成量。结果 与阴性对照组比较,siLDHA下调SK-BR-3和MDA-MB-453细胞LDHA的蛋白水平（ P<0.01）;降低细胞的迁移和侵袭能力（ P<0.001）;下调SK-BR-3细胞的LDH活性,减少两种细胞葡萄糖摄取量和乳酸生成量,差异均有统计学意义（ P<0.05）。结论 干扰LDHA表达通过降低糖酵解从而抑制ErbB2高表达乳腺癌细胞的迁移和侵袭。     

大鼠神经干细胞的分离培养、鉴定和诱导分化

近年研究发现，哺乳动物无论在胚胎发育期还是在成年，其中枢神经系统内都存在具有自我增殖和多向分化潜能的神经干细胞，这一发现为神经损伤修复的研究提供了一条新思路。分离培养神经干细胞，并在体外稳定的增殖与分化，为研究神经干细胞的增殖、分化特性、干细胞移植以及建立细胞系等，提供了细胞来源和保证。本研究利用胎鼠和乳鼠的大脑皮层和海马，用含EGFP和bFGF的NSC培养基培养、分离了具有自我增殖和多向分化潜能的神经干细胞，并观察其生长、增殖和分化特点，以期为神经干细胞的基础研究奠定基础。     

胫骨前肌腱及其止点的应用解剖研究

目的　观察国人胫骨前肌腱止点的形态 ,附着部位以及变异情况 ,为临床应用提供解剖学依据。方法　选择 4 6侧国人灌注后防腐足标本 ,作胫骨前肌腱止点解剖学观察 ,组织学观察 ,记录胫骨前肌腱以内侧楔骨或第一跖骨为主要止点各自的数据 ,测量胫骨前肌腱内外踝突连线平面以下长度。结果　根据胫骨前肌腱止点的形态可分为三型 :束状型 2 8侧 (6 0 .87% ) ;中间型 14侧 (30 .4 3% ) ;分叉型 4侧 (8.7% )。胫骨前肌腱止点以内侧楔骨或第一跖骨为主分别为 4 0侧 (86 .96 % )和 6侧 (13.0 4 % )。成尸足及童尸足于内外踝突连线平面以下胫骨前肌腱的长度分别为 72 .33± 5 .2 9m m和 5 6 .77± 4 .5 4 mm。结论　若作胫骨前肌腱向外移植术时 ,注意将分叉型的变异止点完全切断。束状型和分叉型胫骨前肌腱不宜作半腱外移植术 ;中间型胫骨前肌腱适宜作半腱外移植术     

因意外而中止妊娠的6～8周人胚脑发育及相关因子表达的形态学研究

目的 研究人胚脑早期发育过程中细胞的增殖、分化、凋亡及相关因子的表达变化,为明确人胚脑发育过程中的细胞增殖、分化和凋亡机制提供依据.方法 收集因意外而中止妊娠的6～8周人胚,采用TUNEL染色和免疫组化SABC染色,观察脑的发育、增殖和凋亡细胞的分布及相关因子的表达.结论 人胚脑6周时,端脑、间脑、中脑、后脑与末脑已形成.6～8周,各脑均由生发层(GL)、中间层(IL)和边缘带(MZ)组成.6～7周时,TUNEL法标记的细胞及PCNA、Bcl-2、Bax、Fas、Fas-L、Rb和P53阳性细胞分布于各脑的GL和IL,其沉淀物出现在圆形或椭圆形细胞的胞核和胞浆中;8周时,Fas和Rb阳性细胞分布于各脑的IL,其沉淀物出现在梭形细胞的胞浆和突起中,TUNEL法标记的细胞及其它因子阳性细胞的分布同6～7周.各因子的表达与细胞增殖和凋亡的发生在时间和空间上基本一致.结论 人胚脑发育过程中,神经祖细胞的增殖和凋亡同时发生,Fas、Fas-L和Bax可能介导凋亡的发生, Bcl-2则可能通过抑制细胞凋亡而维持细胞的存活,Rb与P53可能在神经祖细胞正常增殖和分化中起监控和维持作用.     

2-脱氧葡萄糖对乳腺癌MCF7/ErbB2细胞增殖 迁移和侵袭的影响

目的 探讨糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖（2-Deoxy-D-glucose,2-DG）对乳腺癌MCF7/ErbB2细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法 用不同浓度的2-DG（0, 05, 1, 2, 4, 8, 16, 32 mM）处理MCF7/ErbB2细胞48h后,用MTS试剂盒测定细胞的增殖;用Transwell实验检测不同浓度2-DG（0, 0.5, 1, 2 mM）对MCF7/ErbB2细胞的迁移和侵袭的影响;用不同浓度2 DG（0, 0.5, 1, 2 mM）处理MCF7/ErbB2细胞48h后,用葡萄糖和乳酸检测试剂盒分别测定培养基中的葡萄糖浓度和乳酸浓度,并计算细胞对葡萄糖的摄取量和乳酸生成量;用1 mM 2 DG处理MCF7/ErbB2细胞0、4、8、12、24h后,用Western blot检测己糖激酶II（hexokinase II,HKII）蛋白表达水平。结果 与2-DG未处理组比较,2-DG（0.5~32 mM）能抑制MCF7/ ErbB2细胞的增殖;2-DG（0.5, 1, 2 mM）能显著抑制MCF7/ ErbB2细胞的迁移和侵袭（P＜0.001）,同时显著降低葡萄糖摄取量和乳酸生成量（P＜0.001）,而且上述抑制作用均表现出对2-DG剂量的依赖性;1 mM 2-DG 显著下调MCF7/ ErbB2细胞中HKII的蛋白水平。结论 2-DG通过下调HKII蛋白表达降低糖酵解水平,从而抑制乳腺癌MCF7/ ErbB2细胞的增殖、迁移和侵袭。     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及表型和功能特点

目的 建立体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)的方法，探讨其表型和功能特点。方法 用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs，传代扩增，测定生长曲线，通过形态学观察，细胞化学及免疫细胞化学法分析大鼠骨髓MSCs的表型和功能特点。结果 MSCs属骨髓中单个核细胞，密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓MSCs，在含10％小牛血清的L-DMEM中，1、3、5代细胞生长曲线基本相同，增殖快，每传代一次细胞约增加2．2倍。细胞呈均一的成纤维细胞样，表达CD44、CD54、纤维粘连蛋白(fibronectin，FN)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ)。加入地塞米松(Dex 10^-8mol／L)、β-甘油磷酸钠(β-GP 10mmol／L)、抗坏血酸(AA50μg／ml)可诱导MSCs分化为成骨细胞，碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性增高，形成矿化结节。结论 所分离、培养的细胞具有间充质干细胞的表型和功能特点，建立了体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓MSCs的方法。     

MMPs及TIMPs在ACC-M、ACC-2裸鼠移植瘤中的表达

目的:探讨唾液腺腺样囊性癌高低转移细胞株(ACC-M、ACC-2)裸鼠移植瘤中基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)及基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissueinhibitorofmetalloproteinases,TIMPs)的表达。方法:采用ACC-M、ACC-2细胞株,建立ACC-M、ACC-2细胞株的裸鼠皮下移植瘤模型。在2组模型中,每组随机取3只裸鼠,用半定量RT-PCR分析移植瘤中MMP-2、MMP-7、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2基因的表达水平,同时用免疫组化方法检测2个细胞株裸鼠移植瘤的MMP-2、MMP-7、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白的表达情况,检测并记录其积分光密度值。所有检测数据用SPSS11.5软件进行均数t检验处理。结果:半定量RT-PCR和免疫组化结果均显示,MMP-2、MMP-7、MMP-9、TIMP-1的表达为ACC-M显著高于ACC-2(P<0.05);TIMP-2在2个细胞株裸鼠移植瘤的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MMP-2、MMP-7、MMP-9、TIMP-1的表达差异可能与ACC-M、ACC-2转移能力的大小相关。